එන්සයිම යනු වෛද්‍ය විද්‍යාවේ සිට කාර්මික ක්‍රියාවලීන් දක්වා විවිධ ක්ෂේත්‍රවල යෙදෙන අත්‍යවශ්‍ය ජීව විද්යාත්මක අණු වේ. ඒවායේ කාර්යක්ෂමතාව සහතික කිරීම සඳහා, ඉහළ සංශුද්ධතාවයේ එන්සයිම ලබා ගැනීම ඉතා වැදගත් වේ. මේ සඳහා උසස් පිරිසිදු කිරීමේ උපාය මාර්ග භාවිතා කිරීම, ප්රෝටීන් පිරිසිදු කිරීම සහ ජෛව රසායනයේ මූලධර්ම මත ඇඳීම අවශ්‍ය වේ. මෙම සවිස්තරාත්මක මාර්ගෝපදේශය තුළ, අපි ඉහළ සංශුද්ධතාවයේ එන්සයිම සාක්ෂාත් කර ගැනීම සඳහා විවිධ පිරිසිදු කිරීමේ ක්රම සහ ශිල්පීය ක්රම ගවේෂණය කරන්නෙමු.
ප්රෝටීන් පිරිසිදු කිරීම අවබෝධ කර ගැනීම
ප්රෝටීන් පිරිසිදු කිරීම ජෛව රසායනයේ තීරණාත්මක ක්‍රියාවලියක් වන අතර එය සංකීර්ණ මිශ්‍රණයකින් නිශ්චිත ප්‍රෝටීනයක් හුදකලා කිරීම සහ ලබා ගැනීම ඇතුළත් වේ. බොහෝ එන්සයිම ප්රෝටීන වන බැවින් මෙය බොහෝ විට අධි සංශුද්ධතාවයේ එන්සයිම ලබා ගැනීමේ ආරම්භක පියවර වේ. ක්රියාවලිය සාමාන්යයෙන් ප්රධාන අදියර කිහිපයක් ඇතුළත් වේ:
- සෛල ඛාදනය: ප්රෝටීන් පිරිසිදු කිරීමේ පළමු පියවර වන්නේ අපේක්ෂිත එන්සයිමය අඩංගු සෛල විවෘත කිරීමයි.
- ජෛව අණු වෙන් කිරීම: සෛල ලයිස් කළ පසු, ඒවායේ ප්‍රමාණය, ආරෝපණය හෝ වෙනත් ගුණාංග මත පදනම්ව ජෛව අණු වෙන් කළ යුතුය.
- එන්සයිම පිරිසිදු කිරීම: අවසාන වශයෙන්, උනන්දුව ඇති එන්සයිමය මිශ්රණයෙන් හුදකලා කර පිරිසිදු කර ඇත.
පිරිසිදු කිරීමේ උපාය මාර්ග
එන්සයිම පිරිසිදු කිරීම සඳහා උපාය මාර්ග කිහිපයක් භාවිතා කරනු ලබන අතර, ඒ සෑම එකක්ම අද්විතීය වාසි සහ අභියෝග ඉදිරිපත් කරයි. සමහර පොදු පිරිසිදු කිරීමේ ක්රම ඇතුළත් වේ:
1. වර්ණදේහය
වර්ණදේහ විද්යාව ප්රෝටීන් පවිත්‍රකරණයේ බහුලව භාවිතා වන ක්‍රමවේදයකි. ස්ථාවර අවධියක් සහ ජංගම අවධියක් සඳහා ඒවායේ අවකලනය මත පදනම්ව සංකීර්ණ මිශ්‍රණ වෙන් කිරීම එයට ඇතුළත් වේ. එන්සයිම පිරිපහදු කිරීම සඳහා, අනුබද්ධ වර්ණදේහ, අයන හුවමාරු වර්ණදේහ සහ ප්‍රමාණය බැහැර කිරීමේ වර්ණ විද්යාව බහුලව භාවිතා වේ.
2. වර්ෂාපතනය
වර්ෂාපතන ශිල්පීය ක්‍රමවලට ලවණ, කාබනික ද්‍රාවක භාවිතය හෝ pH අගය වෙනස් කිරීම මගින් ඉලක්කගත එන්සයිමය දිය නොවන බවටත් මිශ්‍රණයේ ඉතිරි කොටස් වලින් වෙන් කිරීමටත් සිදුවේ. මෙම ක්‍රමය බොහෝ විට වඩාත් සංකීර්ණ පිරිසිදු කිරීමේ ක්රම වලට පෙර මූලික පියවරක් ලෙස භාවිතා කරයි.
3. Ultrafiltration
Ultrafiltration යනු ඒවායේ ප්‍රමාණය මත පදනම්ව අණු වෙන් කිරීම සඳහා අර්ධ පාරගම්ය පටල භාවිතා කිරීමයි. මෙම තාක්ෂණය විශාල ද්‍රාවණයකින් එන්සයිම සාන්ද්‍රණය කිරීම සහ පිරිසිදු කිරීම සඳහා විශේෂයෙන් ප්‍රයෝජනවත් වේ.
4. විද්යුත් විච්ඡේදනය
SDS-PAGE (සෝඩියම් ඩොඩෙසයිල් සල්ෆේට් පොලිඇක්‍රිලමයිඩ් ජෙල් ඉලෙක්ට්‍රෝෆොරෙසිස්) වැනි විද්යුත් විච්ඡේදක ශිල්පීය ක්රම, ප්රෝටීන ඒවායේ ප්‍රමාණය සහ ආරෝපණය මත පදනම්ව වෙන් කිරීමට භාවිතා කරයි. මෙම ක්‍රමය බොහෝ විට ඉහළ සංශුද්ධතාවය ඇති එන්සයිම ලබා ගැනීම සඳහා වෙනත් පිරිසිදු කිරීමේ ක්රම සමඟ ඒකාබද්ධව භාවිතා වේ.
අධි-පිරිසිදු එන්සයිම සඳහා සලකා බැලීම්
ඉහළ සංශුද්ධතාවයෙන් යුත් එන්සයිම ලබා ගැනීම සඳහා විවිධ සාධක හොඳින් සලකා බැලිය යුතුය:
- විශේෂිත ක්‍රියාකාරකම්: එන්සයිමයක සංශුද්ධතාවය බොහෝ විට තක්සේරු කරනු ලබන්නේ එහි නිශ්චිත ක්‍රියාකාරකම් මත පදනම්ව වන අතර එමඟින් ප්රෝටීන් ඒකකයකට එහි උත්ප්‍රේරක කාර්යක්ෂමතාව මනිනු ලැබේ.
- ස්ථායීතාවය: ඉහළ සංශුද්ධතාවයෙන් යුත් එන්සයිම ගබඩා කිරීම සහ සේවා කොන්දේසි යටතේ විශිෂ්ට ස්ථාවරත්වයක් පෙන්විය යුතුය.
- අපවිත්‍ර ද්‍රව්‍ය ඉවත් කිරීම: එන්සයිමයේ සංශුද්ධතාවය සහතික කිරීම සඳහා පිරිසිදු කිරීමේ ක්රමෝපායන් මගින් අපද්‍රව්‍ය සහ දූෂක ඵලදායි ලෙස ඉවත් කළ යුතුය.
නිගමනය
අධි සංශුද්ධතාවයෙන් යුත් එන්සයිම ලබා ගැනීම බහුවිධ ක්‍රියාවලියක් වන අතර එය ප්රෝටීන් පවිත්‍රකරණය සහ ජෛව රසායන විද්‍යා මූලධර්ම මත පදනම් වූ විවිධ පිරිසිදු කිරීමේ ක්රමෝපායන් යෙදීම අවශ්‍ය වේ. වර්ණදේහ, වර්ෂාපතනය, අල්ට්‍රා ෆිල්ටරේෂන් සහ විද්යුත් විච්ඡේදනය වැනි ශිල්පීය ක්රම භාවිතා කිරීමෙන් පර්යේෂකයන්ට පුළුල් පරාසයක යෙදීම් සඳහා අවශ්‍ය සංශුද්ධතාවය සහ ගුණාත්මක බවින් යුත් එන්සයිම ලබා ගත හැක.